یزد دانلود |
دانلود فایل علمی فایل ورد کامل مقاله علمی درباره بررسی چندشکلی ژنتیکی اگزون ۱ ژن mbl2 و ارتباط آن با سطح سرمی پروتئین MBL در جمعیت منتخب تهران
در حال بارگذاری
توجه : به همراه فایل word این محصول فایل پاورپوینت (PowerPoint) و اسلاید های آن به صورت هدیه ارائه خواهد شد
فایل ورد کامل مقاله علمی درباره بررسی چندشکلی ژنتیکی اگزون ۱ ژن mbl2 و ارتباط آن با سطح سرمی پروتئین MBL در جمعیت منتخب تهران دارای ۱۰ صفحه می باشد و دارای تنظیمات در microsoft word می باشد و آماده پرینت یا چاپ است
فایل ورد فایل ورد کامل مقاله علمی درباره بررسی چندشکلی ژنتیکی اگزون ۱ ژن mbl2 و ارتباط آن با سطح سرمی پروتئین MBL در جمعیت منتخب تهران کاملا فرمت بندی و تنظیم شده در استاندارد دانشگاه و مراکز دولتی می باشد.
توجه : در صورت مشاهده بهم ریختگی احتمالی در متون زیر ،دلیل ان کپی کردن این مطالب از داخل فایل ورد می باشد و در فایل اصلی فایل ورد کامل مقاله علمی درباره بررسی چندشکلی ژنتیکی اگزون ۱ ژن mbl2 و ارتباط آن با سطح سرمی پروتئین MBL در جمعیت منتخب تهران،به هیچ وجه بهم ریختگی وجود ندارد
بخشی از متن فایل ورد کامل مقاله علمی درباره بررسی چندشکلی ژنتیکی اگزون ۱ ژن mbl2 و ارتباط آن با سطح سرمی پروتئین MBL در جمعیت منتخب تهران :
مقدمه
لکتین متصل شونده به مانوز (MBL) یکی از اجزای مهم در ایمنی ذاتی است که توسط هپاتوسیت ها در کبد تولید می شود. MBL جزء خانواده کالکتین ها بوده و برای عملکرد خود نیاز به حضور کلسیم در محیط دارد ۵)و. (۶
MBL در فعال سازی سیستم کمپلمان از مسیر لکتین نقش دارد و برای این کار، از یک طرف به قند موجود در دیواره خارجی میکروارگانیسم ها، و از طرف دیگر به سرین پروتئازهایی به نام MASP متصل می شود. پس از این اتصال، MBL که نقشی همانند مولکول C1q در مسیر کلاسیک کمپلمان دارد (۲)، موجب راه اندازی آبشار فعال سازی کمپلمان می شود و از این طریق باعث حذف میکروارگانیسم مهاجم می شود(۶ و .(۹ به طور کلی مولکول MBL که هوموتریمری از زیر واحد های مشابه است، از بخشهای زیر تشکیل می شود: دمین متصل شونده به کربوهیدارت (CRD) در پایانه C ، ناحیه خمیده، ناحیه کلاژنی و یک ناحیه غنی از سیستئین در پایانه ۸) N و (۱۰ (شکل .(۱ وقوع برهمکنشهای هیدروفوبیک و پیوندهای دی سولفیدی، به خصوص در پایانه N، کمک زیاد به پایداری مولکول MBL می کند.
شکل -۱ نمایی کلی از MBL و دمین CRD
پروتئین MBL توسط ژن mbl2 واقع بر روی بازوی بلند کروموزوم۱۰ (در موقعیت(۱۰q11.2-q21، رمزگذاری می
شود و ۴ اگزون دارد. MBL وزن مولکولی بین -۷۰۰kDa 400 داشته و فرم فعال ان به صورت تترامر است(۱۰ و .(۱۱ از بین پلی مورفیسم های گوناگون موجود در اگزون
۱ ژن mbl2، پلی مورفیسم در کدونهای ۵۲، ۵۴ و ۵۷ ،
بیشترین تأثیر را بر سطح سرمی این پروتئین دارد که به ترتیب با آلل های D ، B و C نشان داده می شوند. به علاوه، در موقعیت +۴ در ۵ UTR هم یک پلی مورفیسم گزارش شده است که در آن نوکلئوتید C (آلل (P به T
(آلل (Q تبدیل می شود. در کدون ۵۲ ، نوکلئوتید C با T و
درکدونهای ۵۴ و ۵۷ ، نوکلئوتید G با A جانشین می شود
۳)، ۵ و (۹ (شکل .(۲
در نتیجه این جابه جاییها، در کدون ۵۲ امینو اسید ارژینین به سیستئین، در کدون ۵۴ گلایسین به اسید اسپارتیک و در کدون ۵۷ گلایسین به اسید گلوتامیک تبدیل می شود. به طور کلی، ژنوتیپ دارای جهش با O و حالت نرمال ژنوم، با A نشان داده می شود ۶)، ۷ و .(۹
مواد و روشها
نمونه های خون: تعداد ۱۴۳ فرد سالم داوطلب اهدای خون، وارد مطالعه شدند. سلامتی این افراد توسط پزشک و به وسیله انجام تستهای غربالگری انتقال خون ایران تأیید شد. نمونه های خون در دو لوله گردآوری شد: یک لوله حاوی ۵cc خون کامل به همراه EDTA برای استخراج
DNA ، و لوله دیگر حاوی ۵cc خون کامل به همراه ژل سیلیکونی جدا کننده، به منظور جداسازی سرم از خون و تعیین سطح سرمی MBL توسط انجام تکنیک الایزا.
استخراج : DNA استخراج DNA از نمونه های خون ، به روش Salting-Out و به صورت دستی انجام شد. در این روش، ابتدا طی چند مرحله، با استفاده از محلولهای لیز کننده و انجام سانتریفیوژ، سلولها لیز می شوند و عصاره سلولی به دست می آید. سپس با استفاده از آنزیم پروتئیناز
۴۹۲
Functional MBL ELISA kit(ligand
مجله پژوهشهای سلولی و مولکولی (مجله زیست شناسی ایران) جلد ۲۶، شماره ۴، ۱۳۹۲
K هضم پروتئینهای سلولی انجام می گیرد و به وسیله اتانول مطلق برای پاکسازی نمونه DNA استفاده می شود.
NaCl این پروتئینها رسوب داده می شوند، در نهایت از
Exon 1 5 UTR
+۲۳۹ +۲۳۰ +۲۲۳ +۴ nt pos:
A to C A to B A to D P to Q allele:
G to A G to A C to T C to T nt sub:
Gly57Glu Gly54Asp Arg52Cys aa Sub:
(G57E) (G54D) (R52C) 5 و معرفی آلل ها و نوکلئوتیدها در هر جایگاه (۹)
شکل -۲ نمایی از نفاط دارای پلی مورفیسم در اگزون ۱ و ناحیه ی ترجمه نشونده ی
: PCR نمونه های DNA استخراج شده، با استفاده از یک جفت پرایمر اختصاصی اگزون ۱، برای تکثیر کل اگزون – ۲۵۶ نوکلئوتید- توسط تکنیک PCR تکثیر شدند. اطلاعات مربوط به پرایمر مورد استفاده، در جدول ۱ آمده است.
پرایمر با استفاده از نرم افزار Primer 3 طراحی، و توسط شرکت سیناژن تولید شد. حجم کل محلول مورد استفاده برای تکثیر هر نمونه، ۲۰µl در نظر گرفته شد که شامل این مواد بود: ۰/۵µl از هریک از پرایمرهای بالا دست و پایین دست، MgCl2 0/8µl ، dNTP 0/5µl، ۲/۵µl بافر، ۰/۲µl
انزیم، ۱۴µl اب و ۱µl از نمونه ی DNA با غلظت . ۲/۱µg/µl تمام نمونه های DNA ابتدا برای جدا شدن دو رشته DNA به مدت دو دقیقه در ۹۵ درجه سانتی گراد قرار گرفتند و پس از اتصال پرایمرها و شروع تکثیر DNA
در دمای ۵۸ درجه سانتی گراد، مرحله گسترش محصولات
PCR به مدت ۵ دقیقه در دمای ۷۲ درجه سانتی گراد صورت پذیرفت. سپس برای اطمینان از انجام درست PCR
و حصول نتیجه، محصولات حاصل از PCR بر روی ژل آگارز ۵ درصد با تکنیک الکتروفورز مورد ارزیابی قرار گرفتند (شکل.(۳
تعیین توالی DNA های تکثیر شده: ۱۴۳ نمونه DNA
حاصل از تکثیر توسط PCR، برای تعیین توالی و مشخص شدن نواحی چند شکل، به شرکت ماکروژن((macrogen
در کره جنوبی ارسال شدند. نتایج حاصل، توسط نرم افزار BioEdit آنالیز شده، و نقاط دارای چند شکلی مشخص شدند. تصاویری از گرافهای حاصل از تعیین توالی و آنالیز
نتایج توسط نرم افزار BioEdit در شکلهای ۴ و ۵ مشخص
است.
شکل -۳ تصویر نمونه PCR شده بر روی ژل آگارز. دو باندی که در تصویر بالا در ناحیه حدود ۳۰۰ کیلو بازی مشخص اند، حاصل تکرار یک نمونه اند. پایین ترین باند مربوط به DNA الگو در سمت چپ تصویر، ۱۰۰ جفت باز طول دارد.
تعیین سطح سرمی : MBL برای تعیین سطح سرمی
MBL، ابتدا پلاسمای نمونه خون این افراد توسط سانتریفیوژ جدا شد و سپس به کمک کیت تشخیص MBL
توسط الایزا –
– elisa), Sanquin Reagents سطح سرمیMBL در هریک از این افراد مشخص شد. در این کیت الایزا، ابتدا مانان به عنوان سوبسترای MBL بر روی سطح میکروچاهکهایی قرار می گیرد و در مرحله بعد پلاسما به این چاهکها افزوده می شود. فرم فعال و تترامر MBL ، به وسیله HRP
۴۹۳
مجله پژوهشهای سلولی و مولکولی (مجله زیست شناسی ایران) جلد ۲۶، شماره ۴، ۱۳۹۲
متصل به آنتی بادی ضد MBL، شناسایی می شود و غلظت ان، با توجه به مقدار جذب نوری آن در ۴۵۰nm، محاسبه می گردد.
آنالیزهای اماری و محاسباتی: نتایچ پلی مورفیسم های به دست آمده و داده های مربوط به سطوح سرمی MBL ، به همراه اطلاعات مربوط به سن و جنس این ۱۴۳ نفر، برای انجام آنالیزهای آماری و ایجاد ارتباط منطقی بین داده ها، در نرم افزار SPSS مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت.
نتایج
در جمعیت مورد مطالعه، هیچ پلی مورفیسمی در موقعیت
+۴ در ۵ UTR دیده نشد. به عبارت دیگر، تمامی افراد در
این جایگاه دارای آلل P بودند. از این ۱۴۳ نفر، ۹۵ نفر
۶۴/۲) درصد) در هیچ یک از کدونهای ۵۲ ، ۵۴ و ۵۷ ،
چند شکلی نشان ندادند. ۲۰ نفر ۱۳/۵) درصد) دارای پلی مورفیسم در کدون ۵۲ (آلل (D بودند و ۲۷ نفر (%۱۸,۲)
در کدون ۵۴ (آلل (B پلی مورفیسم داشتند. در کدون ۵۷ (آلل (C تنها یک مورد پلی مورفیسم به صورت هتروزیگوت مشاهده شد که این نتیجه از لحاظ آماری قابل استناد نیست. اطلاعات موبوط به نوع و فراوانی هریک از پلی مورفیسم های دیده شده، در جدول ۲ قابل مشاهده است.
اشتراکگذاری:
- لینک دانلود فایل بلافاصله بعد از پرداخت وجه به نمایش در خواهد آمد.
- همچنین لینک دانلود به ایمیل شما ارسال خواهد شد به همین دلیل ایمیل خود را به دقت وارد نمایید.
- ممکن است ایمیل ارسالی به پوشه اسپم یا Bulk ایمیل شما ارسال شده باشد.
- در صورتی که به هر دلیلی موفق به دانلود فایل مورد نظر نشدید با ما تماس بگیرید.
