فایل ورد کامل مقاله روش شناسایی یرسینیا انتروکلیتیکا در مواد غذایی و تحلیل علمی استانداردهای آزمایشگاهی

توجه : به همراه فایل word این محصول فایل پاورپوینت (PowerPoint) و اسلاید های آن به صورت هدیه ارائه خواهد شد

 فایل ورد کامل مقاله روش شناسایی یرسینیا انتروکلیتیکا در مواد غذایی و تحلیل علمی استانداردهای آزمایشگاهی دارای ۲۵ صفحه می باشد و دارای تنظیمات در microsoft word می باشد و آماده پرینت یا چاپ است

فایل ورد فایل ورد کامل مقاله روش شناسایی یرسینیا انتروکلیتیکا در مواد غذایی و تحلیل علمی استانداردهای آزمایشگاهی  کاملا فرمت بندی و تنظیم شده در استاندارد دانشگاه  و مراکز دولتی می باشد.

توجه : در صورت  مشاهده  بهم ریختگی احتمالی در متون زیر ،دلیل ان کپی کردن این مطالب از داخل فایل ورد می باشد و در فایل اصلی فایل ورد کامل مقاله روش شناسایی یرسینیا انتروکلیتیکا در مواد غذایی و تحلیل علمی استانداردهای آزمایشگاهی،به هیچ وجه بهم ریختگی وجود ندارد

---

بخشی از متن فایل ورد کامل مقاله روش شناسایی یرسینیا انتروکلیتیکا در مواد غذایی و تحلیل علمی استانداردهای آزمایشگاهی :

روش شناسائی یرسینیا انتروکلی تیکا در مواد غذائی

-۰ مقدمه

جنس یرسینیا با پذیرفتن نام‌های متعددی چون فلاوباکتریوم پسودومولئی، باکتریوم انتروکلی تیکا، پاستور لاپسودوتوبرکلوزیس، پاستور X و ژرم X نهایتا از سال ۱۹۷۴ از خانواده پاستور لاسه جدا و به همراه سه گونه اصلی یرسینیاپستیس، یرسینیا پسودوتوبرکلوزیس و یرسینیا انتروکلی تیکا بطور قطعی در خانواده آنتروباکتریا سه جای گرفت.

این باکتریها از جمله بیماری زاهای مشترک انسان و دام هستند و مهم ترین گونه‌ای که نقش آن در بیماری زایی انسان از سال ۱۹۶۵ به اثبات رسیده است یرسینیا انتروکلی تیکا می‌باشد، شیر خام، گوشت، سبزیجات و آب می‌تواند بعنوان منبع آلودگی این باکتری مطرح باشد.

یرسینیا انتروکلی تیکا می‌تواند عامل بیماری معدی روده‌ای، آدنیت مزانتریک، اریتم گره‌دار عفونت خونی و پلی آرتریت باشد. این ارگانیسم، کوکو باسیلی است گرم منفی، بدون کپسول، بی‌هوازی اختیاری بطول ۱-۳ میکرومتر و عرض ۰/۵ – ۰/۸ میکرومتر که حرکت آن فقط در دمای پائین تر از ۳۰ درجه سلسیوس به کمک فلاژل‌های پیرامونی صورت می‌گیرد. دمای مناسب رشد آن ۲۸-۲۹ درجه سلسیوس PH مناسب آن ۷/۲ – ۷/۴ است و مانند اکثر آنتروباکتریاسه‌ها گلوکز را بدون گاز تخمیر می‌کند و اکسیداز منفی است.

سروتیپ‌های جدیدی چون ۰:۱۳a; 13b, 0:4,32, 0:5,27, 0:21 بیماری‌زا تشخیص داده شده‌اند.

بیشترین سروتیپ‌های بیماری‌زا ۰:۳ ۰:۸, ۰:۹ می‌باشد.

از نظر سرولوژی آگلوتیناسیون‌های متقاطع با ارگانیسم‌هایی مانند سالمونلا، بروسلا، شیگلا، اشری شیاکلی و ویبربو گزارش شده است.

۱ ـ هدف و دامنه کاربرد
هدف از تدوین این استاندارد ارائه روش جداسازی و شناسایی یرسینیا انتروکلی تیکای بیماری زا برای انسان است . این روش در مورد فرآورده‏های غذایی انسان و دام کاربرد دارد . ۲ ـ واژه‏ها و تعاریف در این استاندارد واژه‏ها با تعاریف زیر بکار می‏روند :
هدف از تدوین این استاندارد ارائه روش جداسازی و شناسایی یرسینیا انتروکلی تیکای بیماری زا برای انسان است . این روش در مورد فرآورده‏های غذایی انسان و دام کاربرد دارد .

۲ ـ واژه‏ها و تعاریف
در این استاندارد واژه‏ها با تعاریف زیر بکار می‏روند : ۲ ـ ۱ ـ یرسینیا آنتروکلی تیکای بیماری زا باکتریهای سرما گرایی هستند که اگر طبق روش مشروح در این استاندارد آزمایش شوند روی محیط های جامد انتخابی پرگنه‏های ویژه‏ای ایجاد می‏نمایند که از نظر خواص بیوشیمیایی با معیارهایی بیماری زائی این استاندارد مطابقت می‏کند .
در این استاندارد واژه‏ها با تعاریف زیر بکار می‏روند :

۲ ـ ۱ ـ یرسینیا آنتروکلی تیکای بیماری زا

باکتریهای سرما گرایی هستند که اگر طبق روش مشروح در این استاندارد آزمایش شوند روی محیط های جامد انتخابی پرگنه‏های ویژه‏ای ایجاد می‏نمایند که از نظر خواص بیوشیمیایی با معیارهایی بیماری زائی این استاندارد مطابقت می‏کند .

۲ ـ ۲ ـ شناسایی یرسینیا آنتروکلی تیکا

شامل حضور یا عدم حضور این باکتری در مقدار معینی از فرآورده غذایی است که بر طبق روش مشروح در این استاندارد تعیین می‏شود .

۳ ـ اساس آزمایش

شناسایی یرسینیا آنتروکلی تیکای احتمالا بیماری زا در طی سه مرحله پی در پی زیر صورت می‏گیرد . ۳ ـ ۱ ـ غنی سازی در محیط مایع انتخابی ۳ ـ ۱ ـ ۱ ـ کشت نمونه مورد آزمون در دو محیط غنی کننده زیر :
شناسایی یرسینیا آنتروکلی تیکای احتمالا بیماری زا در طی سه مرحله پی در پی زیر صورت می‏گیرد .

۳ ـ ۱ ـ غنی سازی در محیط مایع انتخابی

۳ ـ ۱ ـ ۱ ـ کشت نمونه مورد آزمون در دو محیط غنی کننده زیر :

الف آبگوشت نمک های صفراوی و سوربیتول و پپتن

Peptone Sorbitol and Bile salts Broth (PSB )

ب : آبگوشت ایرگازان ـ تیکارسیلین وکلرات پتاسیم

Jrgasan ticarcillin and Potassium chlorate broth (ITC)

۳ ـ ۱ ـ ۲ ـ گرمخانه گذاری

کشت (PSB) در دمای ۲۵ ـ ۲۲ درجه سلسیوس بمدت ۳ تا ۵ روز

کشت (ITC) در دمای ۲۵ ـ ۲۲ درجه سلسیوس بمدت ۲ روز (۴۸ ساعت )

۳ ـ ۲ ـ کشت در محیطهای جامد

کشت سطحی از محیطهای PSB.ITC بترتیب در محیطهای جامد زیر :

۳ ـ ۲ ـ ۱ ـ محیط سفسولودین ـ ایرگازان و نووبیوسین آگار

Cefsulodin Irgasan and novobiocin agar (CIN)

۳ ـ ۲ ـ ۲ ـ محیط سالمونلا ـ شیگلا آگار حای ذرکسی کلات سدیم و کلرور کلسیم

Salmonella / Shigella agar with Sodium desoxychlate and Calcium chloride (SSDC)

۳ ـ ۲ ـ ۳ ـ گرمخانه گذاری

محیطهای CIn و SSDC در دمای ۳۰ درجه سلسیوس گرمخانه گذاری کنید . پس از ۲۴ ساعت و در صورت لزوم پس از ۴۸ ساعت متناسب با محیط , کشت ها را به منظور حضور پرگنه های ویژه یرسینیا آنتروکلی تیکا بررسی کنید .

۳ ـ ۳ ـ تایید

در این مرحله روی پرگنه‏های مشکوک به یرسینیا آزمایش‏های بیوشیمیایی , آزمایش های خاص منطبق با معیارهای بیماری زایی و در صورت امکان آزمایش های سرولوژیکی برای تایید انجام می‏شود .

به راهنمای روش کار مراجعه شود .

۴ ـ محیطهای کشت ومعرف های لازم

۴ ـ ۱ ـ کلیات بدلیل تعداد زیاد محیطهای کشت و معرف‏ها و برای وضوح شرح آزمایش , ترکیبات محیطها , جزییات مربوط به تقسیم و نگهداری آنها به صورت پیوست در استاندارد آمده است . ۴ ـ ۲ ـ محیطهای غنی کننده
۴ ـ ۱ ـ کلیات

بدلیل تعداد زیاد محیطهای کشت و معرف‏ها و برای وضوح شرح آزمایش , ترکیبات محیطها , جزییات مربوط به تقسیم و نگهداری آنها به صورت پیوست در استاندارد آمده است .

۴ ـ ۲ ـ محیطهای غنی کننده

۴ ـ ۲ ـ ۱ ـ محیط مایع حاوی پیتن , سوربیتول و نمکهای صفرا (PSB)

۴ ـ ۲ ـ ۲ محیط مایع حاوی ایرگازان ـ تیکارسیلین وکلرات پتاسیم (ITC)

۴ ـ ۳ ـ محیطهای کشت

۴ ـ ۳ ـ ۱ ـ سفسولودین ـ ایرگازان و نووبیوسین حاوی آگار (CIN)

۴ ـ ۳ ـ ۲ ـ سالمونلا ـ شیگلا آگار حاوی ذرکسی کلات سدیم و کلرور سدیم (SSDC)

۴ ـ ۳ ـ ۳ ـ نوترنیت آگار

۴ ـ ۴ ـ محیط های شناسایی ومعرفها

۴ ـ ۴ ـ ۱ ـ محیط کشت اوره تریپتوفان

۴ ـ ۴ ـ ۲ ـ معرف شناسایی تریپتوفان دی آمیناز

۴ ـ ۴ ـ ۳ ـ کلیگر آگار

۴ ـ ۴ ـ ۴ ـ معرف تشخیص اکسیداز

۴ ـ ۴ ـ ۵ ـ محیط های کشت دکربوکسیلاز

۴ ـ ۴ ـ ۵ ـ ۱ ـ محیط کشت لایزین دکربوکسیلاز

۴ ـ ۴ ـ ۵ ـ ۲ ـ محیط کشت اورنی تین دکربوکسیلاز

۴ ـ ۴ ـ ۶ ـ محیط برای تخمیر قندها ( ساکارز ( رامنوز یا سالیسین )

۴ ـ ۴ ـ ۷ ـ محیط سیمون سیترات

۴ ـ ۴ ـ ۸ ـمحیط صفرا و اسکولین آگاردار

۴ ـ ۴ ـ ۹ کازئین سویا اگاردار

۴ ـ ۴ ـ ۱۰ ـ کارتین سویا آگار دار برای شناسایی آمیداز

۴ ـ ۴ ـ ۱۱ ـ محلول سولفات آمونیوم و آهن دو ظرفیتی برای شناسایی پیرازین آمیداز

مازئین سویا آگاردار حاوی منیزیم وآگزالات

۴ ـ ۵ ـ سرم فیزیولوژی

۴ ـ ۶ ـ پتاسیم هیدروکساید در سرم فیزیولوژی

۴ ـ ۷ ـ محیط SIM آگار

۵ ـ وسایل ضروری
یادآوری : بجای ظرف شیشه‏ای چند بار مصرف از وسایل یکبار مصرف بشرط دارابودن ویژگیهای مناسب می‏توان استفاده کرد. . ۵ ـ ۱ ـ وسیله سترون کردن خشک ( آون ) یا سترون کردن مرطوب ( اتوکلاو ) ۵ ـ ۲ ـ گرمخانه قابل تنظیم در ۲۲±۱درجه سلسیوس و ۲۵±۱درجه سلسیوس.
یادآوری : بجای ظرف شیشه‏ای چند بار مصرف از وسایل یکبار مصرف بشرط دارابودن ویژگیهای مناسب می‏توان استفاده کرد. .

۵ ـ ۱ ـ وسیله سترون کردن خشک ( آون ) یا سترون کردن مرطوب ( اتوکلاو )

۵ ـ ۲ ـ گرمخانه قابل تنظیم در ۲۲±۱درجه سلسیوس و ۲۵±۱درجه سلسیوس.

۵ ـ ۳ ـ قفسه خشک کردن یا آون دارای تهویه هوا با جابجایی و قابل تنظیم در ۳۷±۱ درجه و ۵۵±۱ درجه سلسیوس

۵ ـ ۴ ـ حمام آب قابل تنظیم در دمای ۴۵±۰/۵درجه سلسیوس و ۵۰±۰/۵درجه سلسیوس

۵ ـ ۵ ـ لوله‏های آزمون با ابعاد ۱۸۰*۱۸ و ۱۸۰*۹ و ۵۰*۱۲ میلی متر

۵ ـ ۶ ـ ظروف شیشه ای و بطری های با گنجایش مناسب

۵ ـ ۷ ـ ظروف پتری شیشه‏ای یا پلاستیکی بقطر ۱۰۰ ـ ۹۰ میلی متر

۵ ـ ۸ ـ پی پت‏های ۱ و ۱۰ میلی لیتری با درجه بندی ۰/۱ میلی لیتر

۵ ـ ۹ ـ مکنده‏های لاستیگی ( پوآر ) مخصوص پی پت

۵ ـ ۱۰ ـ حلقه کشت بقطر تقریبی ۳ میلی متر و سوزن کشت سر صاف از جنس پلاتین / ایریدوم یا نیکل / کروم و یا پی پت پاستور شیشه‏ای بجای سوزن کشت .

یادآوری : حلقه و سوزن کشت یکبار مصرف می‏تواند استفاده شود حلقه کشت از جنس نیکل / کرم برای انجام آزمون اکسیداز مناسب نیست .

۵ ـ ۱۱ ـ PH متر بادقت ±۰/۱ واحد PH در ۲۵ درجه سلسیوس

۵ ـ ۱۲ ـ منبع نور مناسب برای تابش مورب

۵ ـ ۱۳ ـ ذره بین یا میکروسکوپ

۵ ـ ۱۴ ـ مخلوط کن ( استوماکر )

۶ ـ نمونه برداری

نمونه برداری از فرآورده باید با رعایت اصول مربوط به نمونه برداری فرآورده غذایی برای آزمایش‏های میکربی صورت گیرد . نمونه‏ای که به آزمایشگاه می‏رسد باید معرف واقعی کالا بوده و در حین نمونه برداری و حمل و نقل دچار آسیب دیدگی و تغییر نشده باشد . ۷ ـ آماده کردن نمونه نمونه مورد آزمون با توجه به استاندارد ملی شماره ۳۵۶ ایران (( آماده کردن نمونه غذایی و تهیه رقم اعشاری نمونه برای آزمایش های میکربی )) آماده شود .
نمونه برداری از فرآورده باید با رعایت اصول مربوط به نمونه برداری فرآورده غذایی برای آزمایش‏های میکربی صورت گیرد . نمونه‏ای که به آزمایشگاه می‏رسد باید معرف واقعی کالا بوده و در حین نمونه برداری و حمل و نقل دچار آسیب دیدگی و تغییر نشده باشد .

۷ ـ آماده کردن نمونه
نمونه مورد آزمون با توجه به استاندارد ملی شماره ۳۵۶ ایران (( آماده کردن نمونه غذایی و تهیه رقم اعشاری نمونه برای آزمایش های میکربی )) آماده شود . ۸ ـ روش آزمایش ۸ ـ ۱ ـ سوسپانسیون‏های اولیه
نمونه مورد آزمون با توجه به استاندارد ملی شماره ۳۵۶ ایران (( آماده کردن نمونه غذایی و تهیه رقم اعشاری نمونه برای آزمایش های میکربی )) آماده شود .

۸ ـ روش آزمایش
۸ ـ ۱ ـ سوسپانسیون‏های اولیه ۸ ـ ۱ ـ ۱ ـ مقدار معینی ( وزن ی حجم نمونه ) از نمونه مورد آزمایش را به حجم مشخصی از محیط PSB منتقل کنید بطوری که رقت یکدهم وزن به حجم یا حجم به حجم بدست آید و بعد با استوماکر آن را مخلوط کنید تا یکنواخت شود . ۸ ـ ۱ ـ ۲ سوسپانسیون دیگری از نمونه , با محیط ITC با رقت وزن به حجم یا حجم به حجم تهیه کنید .
۸ ـ ۱ ـ سوسپانسیون‏های اولیه

۸ ـ ۱ ـ ۱ ـ مقدار معینی ( وزن ی حجم نمونه ) از نمونه مورد آزمایش را به حجم مشخصی از محیط PSB منتقل کنید بطوری که رقت یکدهم وزن به حجم یا حجم به حجم بدست آید و بعد با استوماکر آن را مخلوط کنید تا یکنواخت شود .

۸ ـ ۱ ـ ۲ سوسپانسیون دیگری از نمونه , با محیط ITC با رقت وزن به حجم یا حجم به حجم تهیه کنید .

۸ ـ ۲ ـ غنی سازی ۱

۸ ـ ۲ ـ ۱ ـ محیط PSB کشت شده را در ۲۵ ـ ۲۲ درجه سلسیوس بمدت ۵ روز بدون هم زدن و ۲ تا ۳ روز با هم زدن قرار دهید .

۸ ـ ۲ ـ ۲ ـ محیط ITC کشت شده را در ۲۵ درجه سلسیوس برای ۲ ورز (

۴۸ ساعت ) گرمخانه گذاری کنید .

۸ ـ ۳ ـ کشت

۸ ـ ۳ ـ ۱ ـ با حلقه کشت از محیط (PSB) بردارید و روی محیط جامد (CIN) طوری کشت دهید که پرگنه های مجزا حاصل شود .

۸ ـ ۳ ـ ۲ ـ با پی پت سترون , ۰/۵ میلی لیتر از کشت PSB را به ۴/۵ میلی لیتر

محلول پتاسیم هیدروکساید ( محیط شماره ۲۰ پیوست ) بیفزایید و خوب مخلوط کنید و بعد از ۲۰ ثانیه با حلقه کشت از ان بردارید و در سطح محیط (CIN) طوری کشت دهید که پرگنه‏های مجزا حاصل شود .

۸ ـ ۳ ـ ۳ ـ با حلقه کشت از ITC کشت شده بردارید و در سطح جامد SSDC برای حصول پرگنه‏های مجزا کشت دهید .

۸ ـ ۳ ـ ۴ ـ ظروف پتری بندهای ۸ ـ ۳ ـ ۱ و ۸ ـ ۳ ـ ۲ ـ و ۸ ـ ۳ ـ ۳ را بطور وارونه در گرمخانه در دمای ۳۰ درجه سلسیوس برای ۲۴ ساعت قرار دهید .

۸ ـ ۳ ـ ۵ ـ ظروف پتری را از گرمخانه خارج و آنها را به منظور شناسایی پرگنه های ویژه یرسینیا آنتروکلی تیکا در نور مایل (۴۵ درجه ) با ذره بین بررسی کنید .

الف – پرگنه های یرسینیا آنتروکلی تیکا در محیط CIN

کوچک ( برابر یا کوچکتر از یک میلی متر ) صاف یا مرکز قرمز و حاشیه شفاف و در زیر نور مایل با ظاهری گرانول دار ریز و بدون قوس و قزح است .

ب – پرگنه‏های یرسینیا آنتروکلی تیکا در محیط SSDC

کوچک ( برابر یا کوچکتر از یک میلی متر ) خاکستری رنک یا حاشیه نامشخص و در زیر نور مایل با ظاهری دانه دار و ریز و بدون قوس و قزح است

۸ ـ ۳ ـ ۶ ـ اگر پرگنه های یرسینیاریز و یا کمرنگ باشند و یا دیده نشوند ظروف پتری را برای ۲۴ ساعت دیگر گرمخانه گذاری کنید .

۸ ـ ۳ ـ ۷ ـ انتخاب پرگنه‏ها

از هر ظرف پتری هر یک از محیطهای انتخابی بند ۸ ـ ۳ ـ ۱ و ۸ ـ ۳ ـ ۲ و ۸ ـ ۳ ـ ۳, ۵ پرگنه مشکوک بردارید . اگر در یک ظرف ۵ پرگنه مشکوک یا کمتر وجود داشت تمام آنها را برای تایید بردارید .

۸ ـ ۳ ـ ۸ ـ جدا سازی پرگنه‏ها

پرگنه‏های انتخاب شده را روی محیط نوتر نیت آگار ( محیط شماره ۵ پیوست ) کشت خطی دهید و سپس ظروف پتری را برای ۲۴ ساعت و در ۳۰ درجه سلسیوس گرمخانه گذاری کنید . پس از این مدت ظروف از گرمخانه خارج و آنها را در دمای ( ۵ ـ ۰) درجه سلسیوس ( دمای یخچال ) برای آزمایش‏های تاییدی و بیماری زایی نگهداری کنید .

۹ ـ آزمایش های بیو شیمیایی

از کشت های خالص برای آزمایش های زیر استفاده می‏شود . ۹ ـ ۱ ـ آزمایش های تشخیص بیو شیمیایی ۹ ـ ۱ ـ ۱ ـ آزمایش اوره از
از کشت های خالص برای آزمایش های زیر استفاده می‏شود .

۹ ـ ۱ ـ آزمایش های تشخیص بیو شیمیایی

۹ ـ ۱ ـ ۱ ـ آزمایش اوره از

با میله شیشه‏ای یا سوزن کشت از پرگنه‏های مجزا شده در محیط نوترنیت آگار برداریدو بطور دقیق زیر محیط مایع اوره ترپیتوفان ( محیط شماره ۶ پیوست ) کشت دهید و برای ۲۴ ساعت در دمای ۳۰ درجه سلسیوس گرمخانه گذاری کنید .

نتیجه ـ رنگ صورتی بنفش نشان دهنده واکنش مثبت اوره آز است .

رنگ زرد نارنجی نشان دهنده واکنش اوره از است .

۹ ـ ۱ ـ ۲ ـ آزمایش تریپتوفان دی آمیناز

سه قطره ازمعرف شناسایی تریپتوفان دی آمیناز ( شماره ۷ پیوست ) را به کشت حاصل از بند ۹ ـ ۱ ـ ۱ بیفزایید .

نتیجه : رنگ قهوه‏ای نشان دهنده واکنش مثبت است .

۹ ـ ۱ ـ ۳ ـ کلیگلر آگار

از پرگنه‏های خالص شده روی نوترینت آگار برداشته و در سطح محیط مورب کلیگلر آگار ( شماره ۸ پیوست ) بطور خطی کشت دهید و بعد سوزن را به عمق محیط فرو برید . سپس آن را در دمای ۳۰ درجه سلسیوس برای ۲۴ ساعت تا ۴۸ ساعت گرمخانه گذاری کنید و . سپس تغییرات حاصله در محیط را بشرح زیر مورد بررسی قرار دهید و نتیجه‏گیری کنید .

۹ ـ ۱ ـ ۴ آزمایش اکسیداز

با میله شیشه‏ای قسمتی از پرگنه مجزا و خالص یرسینیا را بردارید و روی یک کاغذ صافی مرطوب شده با معرف اکسیداز ( شماره ۹ پیوست ) یا روی دیسک قابل دسترس تجارتی تماس دهید ( از سوزن کشت یا حلقه کشت نیکل / کروم برای این منظور استفاده نشود).

نتیجه : چنانچه رنگ کاغذ صافی در مدت ۱۰ ثانیه ارغوانی روشن , بنفش و یا آبی تیره نشود آزمایش اکسیداز منفی است .

توجه ـ علاوه بر آزمایش‏های بیوشیمیایی فوق از آزمون حرکت نیز جهت تشخیص یرسینیا می‏توان استفاده کرد .

۹ ـ ۱ ـ ۵ ـ آزمایش حرکت

از پرگنه های مجزا و خالص یریسنیا بردارید و بطور عمودی در دو لوله محتوی محیط SIM آگار ( شماره ۲۱ پیوست ) فرو برید و یکی از دو لوله را در ۲۵ درجه و دیگری را در ۳۷ درجه سلسیوس برای ۲۴ ساعت گرمخانه گذاری کنید و پس از این مدت آنها را بررسی کنی

د .

نتیجه : در صورتی که باکتری در محیط کشت به طرفین انتشار یافته باشد و کدورت در آن منطقه حاصل شده باشد آزمایش حرکت مثبت است .

۹ ـ ۱ ـ ۶ ـ انتخاب پرگنه‏ها

پرگنه هایی که خصوصیات مندرج در جدول شماره یک را دارا هستند برای آزمایش‏های تاییدی انتخاب ‏شوند .

(۱) – سویه های اوره آز منفی از یرسینیا انتروکلی تیکا گزارش شده اند که بیماری زا نیستند .

(۲) – در موقع تشکیل گاز از گلوکز ممکن است کمی حباب هوا ایجاد شود اگر چه یرسینیا معمولا قندها را بدون ایجاد گاز تخمیر میکند ولی بعضی از سویه های یرسینیا ( بیووار ۳ ) ممکن است یک یا دو حباب ایجاد کند ( ایجاد گاز ضعیف )

(۳) – برخی از سویه های یرسینیا انتروکلی تیکا لاکتوز + از فراوره های لبنی جدا شده اند که معمولا بیماری زا نیستند .

۹ ـ ۲ ـ آزمایش‏های تاییدی بیوشیمیایی

۹ ـ ۲ ـ ۱ ـ آزمایش لایزین دکربوکسیلاز

با سوزن با حلقه کشت یا میله شیشه‏ای از پرگنه هایی مجزا و خالص شده روی نوترنیت آگار بردارید و در محیط لایزین دکربوکسیلاز ( شماره ۱۰ پیوست ) کشت دهید و برای ۲۴ ساعت در ۳۰ درجه سلسیوس گرمخانه گذاری کنید .

نتیجه : پیدایش رنگ بنفش در محیط پس از گرمخانه گذاری نشان دهنده واکنش مثبت است و پیدایش رنگ زرد در محیط پس از گرمخانه گذاری نشان دهنده واکنش منفی است .

۹ ـ ۲ ـ ۲ ـ آزمایش اورنی تین دکربوکسیلاز

از پرگنه‏های خالص بردارید و در محیط اورنی تین ( شماره ۱۱ پیوست ) کشت دهید و ۲۴ ساعت در ۳۰ درجه سلسیوس گرمخانه گذاری کنید .

نتیجه : پیدایش رنگ بنفش پس از گرمخانه گذاری نشان دهنده واکنش مثبت است و پیدایش رنگ زرد در محیط پس از گرمخانه گذاری نشان دهنده واکنش منفی است .

۹ ـ ۲ ـ ۳ ـ تخمیر ساکارز و رامنوز

از پرگنه هیا خالص بردارید و در محیطهای قندی مایع ( شماره ۱۲ پیوست ) کشت دهید و برای ۲۴ ساعت در ۳۰ درجه سلسیوس گرمخانه گذاری کنید .

نتیجه : پیدایش رنگ زرد پس از گرمخانه گذاری نشان دهنده واکنش مثبت است و پیدایش رنگ قرمز پس ازگرمخانه گذاری نشان دهنده واکنش منفی است .

۹ ـ ۲ ـ ۴ ـ هیدرولیز سیترات

از پرگنه‏های خالص یرسینیا بردارید و در سطح مورب محیط سیمون سیترات ( شماره ۱۳ پیوست ) کشت دهید و آن را برای ۲۴ ساعت در ۳۰ درجه سلسیوس گرمخانه گذاری کنید .

نتیجه : پیدایش رنگ آبی در محیط پس از گرمخانه گذاری نشان دهنده و

اکنش مثبت است و اگر در محیط تغییر رنگ ایجاد نشود هیدرولیز سیترات منفی است .

۹ ـ ۳ ـ آزمایش‏های تاییدی بیماری زائی