یزد دانلود |
دانلود فایل علمی فایل ورد کامل مقاله علمی درباره بررسی اثر پکتین اصلاحشده مرکبات (MCP) بر فرآیند رگزایی سلولهای اندوتلیال HUVEC و دودمان سلولی سرطان پروستات انسانی DU145
در حال بارگذاری
توجه : به همراه فایل word این محصول فایل پاورپوینت (PowerPoint) و اسلاید های آن به صورت هدیه ارائه خواهد شد
فایل ورد کامل مقاله علمی درباره بررسی اثر پکتین اصلاحشده مرکبات (MCP) بر فرآیند رگزایی سلولهای اندوتلیال HUVEC و دودمان سلولی سرطان پروستات انسانی DU145 دارای ۱۶ صفحه می باشد و دارای تنظیمات در microsoft word می باشد و آماده پرینت یا چاپ است
فایل ورد فایل ورد کامل مقاله علمی درباره بررسی اثر پکتین اصلاحشده مرکبات (MCP) بر فرآیند رگزایی سلولهای اندوتلیال HUVEC و دودمان سلولی سرطان پروستات انسانی DU145 کاملا فرمت بندی و تنظیم شده در استاندارد دانشگاه و مراکز دولتی می باشد.
توجه : در صورت مشاهده بهم ریختگی احتمالی در متون زیر ،دلیل ان کپی کردن این مطالب از داخل فایل ورد می باشد و در فایل اصلی فایل ورد کامل مقاله علمی درباره بررسی اثر پکتین اصلاحشده مرکبات (MCP) بر فرآیند رگزایی سلولهای اندوتلیال HUVEC و دودمان سلولی سرطان پروستات انسانی DU145،به هیچ وجه بهم ریختگی وجود ندارد
بخشی از متن فایل ورد کامل مقاله علمی درباره بررسی اثر پکتین اصلاحشده مرکبات (MCP) بر فرآیند رگزایی سلولهای اندوتلیال HUVEC و دودمان سلولی سرطان پروستات انسانی DU145 :
مقدمه
آنژیوژنزیس یا رگزایی فرآیند فیزیولوژیک شرکت کننده در بهبود زخم، رشد و تکوین جنین، زایمان و تکثیر آندومتر میباشد. رگزایی همچنین فرآیند اساسی در تکثیر، گسترش و متاستاز سلولهای سرطانی است ۲) و.(۱۳ زمانی که اندازه تومور کمتر از ۰/۵mm است، مواد غذایی و اکسیژن مورد نیاز سلولهای سرطانی از طریق انتشار تأمین می شود
(avascular stage)، اما هنگامی که اندازه تومور بیش از ۰/۵mm باشد، مواد غذایی و اکسیژن حاصل از انتشار به
اندازه کافی به سلولها نخواهد رسید و در این زمان سلولهای سرطانی شروع به تولید فاکتورهای رگزایی از جمله VEGF، FGF2 و PDGF می کنند ( vascular 2) (stageو.(۳ تومور تا زمانی که بتواند با ترشح فاکتورهای رگزا باعث رشد رگهای جدید شود، درمرحله کمون می ماند. فرآیند رگزایی شامل مراحل ترشح فاکتور رگزا ، قرار گیری آن روی گیرنده، تخریب غشاءی اولیه و
۴۲۶
Gal -3
مجله پژوهشهای سلولی و مولکولی (مجله زیست شناسی ایران)
مهاجرت سلولهای اندوتلیالی به سوی تومور می باشد ۷) و .(۱۳
یکی از مواد اصلی تشکیل دهنده دیواره سلولی در سلولهای گیاهی پکتینها می باشند که در میان پلی ساکاریدها بیشترین پیچیدگی ساختاری را دارا هستند .
پکتین مرکبات اغلب در گوشت و پوست مرکباتی مثل گریپ فروت ، پرتقال و لیمو یافت می شود. این ماده، پلی ساکارید بسیار منشعب و پیچیده به همراه تعداد زیادی زیر واحدهای گالاکتوزید است و به وسیله تغییر pH یا دما می توان آن را به صورت پکتین تغییر یافته در آورد .(۱۲)
تحقیقات نشان داده است که، MCP باعث القای آپوپتوز در سلولهای سرطانی شده و از مهاجرت آنها جلوگیری می کند. بنابراین مانع بروز متاستاز می گردد .(۴) در سلولهای سرطانی، Gal -3 باعث اتصال سلولها به اندوتلیوم رگهای
خونی میگردد، بنابراین میتواند در متاستاز
سلولهای سرطانی نقش مهمی ایفا کند(MCP .(1 در سطح سلولهای سرطانی به Gal-3 متصل و مانع از اتصال آن به سایر گیرنده های سطح سلولی (که بر روی سلولهای دیگر مستقر می باشند) میشود. مطالعات نشان می دهند که گیرنده Gal- 3 عامل القای حرکت و مهاجرت سلولهای اندوتلیال بر روی ماتریژل و ایجاد شبکه های شبه مویرگی دراین سلولها به صورت in vitro می باشد . MCP با مهار
Gal-3، مانع مهاجرت سلولهای اندوتلیال و شکل گیری شبکه های شبه مویرگی می گردد. در مدلهای سرطانی، تغذیه با MCP سبب مهار رگزایی و مهار متاستاز میشود
.(۴)
در پژوهش حاضر اثر پکتین تغییر یافته مرکبات در سلولهای سرطانی پروستات DU145 در موارد زیر مورد بررسی قرار گرفته است:
• بررسی اثر پکتین مرکبات تغییر یافته بر درصد زیستایی سلولهای سرطانی DU145 و سلولهای آندوتلیالی
HUVEC
جلد ۲۶، شماره ۴، ۱۳۹۲
• بررسی اثر MCP در میزان رگزایی سلولهای HUVEC
• بررسی اثر این ماده روی مهاجرت سلولهای HUVEC
در این مطالعه نشان داده شده است که به کاربردن MCP
روی دودمان سلولهای سرطان پروستات DU145 می تواند مهاجرت آنها را مهار کند و از متاستازی شدن آنها جلوگیری نماید. بنابراین شاید بتوان با دسترسی به داروهای غیرشیمیایی مؤثر در مهار متاستاز، با توجه به کم بودن اثرات جانبی این مواد، از آنها در از بین بردن این سلولها استفاده کرد و میزان مصرف داروهای شیمیایی را کاهش داد.
مواد و روشها
کشت سلول: در اینجا، به منظور رشد و تکثیر سلولهای
DU145 از محیط RPMI 1640 ، که به آن ۱۰ درصد سرم جنین گاو اضافه شده بود، استفاده گردید. کشت سلولهای
HUVEC در محیط DMEM/HamsF12 حاوی ۲۰ درصد سرم جنین گاو صورت گرفت. برای سترون کردن محیط و جلوگیری از آلودگی، پنی سیلین با غلظت ۱۰۰ UI/ml و
استرپتومایسین با غلظت ۱۰۰ g/ml به محیط اضافه و pH
مناسب برای آن بین ۷-۷/۲ تنظیم گردید.
آماده سازی پکتین تغییریافته مرکبات: تهیه پکتین تغییر یافته با توجه به روش انجام شده توسط آوراهام راز صورت گرفت. برای این منظور محلول ۱/۵ درصد پکتین تهیه گردید، سپس pH محلول حاصل توسط ۳ NaOH
نرمال به ۱۰ رسانده شد و پس از یک ساعت انکوباسیون در دمای ۵۵ درجه سانتی گراد، توسط محلول HCL، روی
۳ pH تنظیم گردید. محلول حاصل به مدت یک شبانه روز در دمای محیط نگهداری و سپس به آن اتانل اضافه گردید.
محلول ژلاتینی حاصل در نهایت پس از عبور از کاغذ صافی، خشک و به عنوان MCP مورد استفاده قرار گرفت
.(۱۰)
۴۲۷
مجله پژوهشهای سلولی و مولکولی (مجله زیست شناسی ایران) جلد ۲۶، شماره ۴، ۱۳۹۲
تعیین درصد زیستایی: به منظور تعیین درصد زیستایی سلولها از روش تریپان بلو استفاده شد. ابتدا تعداد ۲×۱۰۵
سلول در ظروف ۲۴ چاهکی کشت داده شد و بعد از ۲۴
ساعت پیش انکوباسیون، سلولهای DU145 و HUVEC با غلظتهای مختلف ۱ g/ml) MCP، ۰/۵، ۰/۱، ۰/۰۵، (۰/۰۱
تیمار شدند. در مورد سلولهای HUVEC علاوه بر MCP
از (Phenethyl Isothiocyanate) PEITC (با غلظت
۶/۸ mM و (۳/۴ به عنوان کنترل منفی و ng/ml) VEGF
۴۰ ، ۳۰ و ( ۱۵ به عنوان کنترل مثبت استفاده شده است
۱۴) و .(۱۵ پس از طی دوره های زمانی ۲۴ و ۴۸ ساعت انکوباسیون سلولها توسط تریپان بلو ۴ درصد ، رنگ آمیزی و درصد سلولهای زنده به وسیله میکروسکوپ نوری تعیین گردید.
کشت سه بعدی سلولهای :HUVEC به منظور کشت سه بعدی سلولهای HUVEC از کلاژل (ژل کلاژن) استفاده شد. برای تهیه این ژل ابتدا کلاژن نوع (Sigma) I در اسید استیک ۰/۱ مولار محلول و پس از افزودن ۱۰۰ µlمحیط کشت ۱۰X، pH آن توسط NaOH نرمال روی ۷ تنظیم گردید. محلول حاصل در ظروف کشت ۹۶ چاهکی ریخته و به منظور ایجاد ژل به مدت ۳۰- ۲۰ دقیقه در دمای ۳۷
درجه سانتی گراد نگهداری شد.
بعد از آماده شدن کلاژل ، تعداد۱×۱۰۴ سلول در هر چاهک برای ۴۸ ساعت کشت داده شد. در این مدت کم کم شبکه های شبه مویرگی شروع به ظاهر شدن می کنند.
سپس محیط رویی سلولهای DU145 که از قبل به مدت
۲۴ ساعت با غلظتهای مختلف MCP تیمار شده بود، با محیط رویی سلولهای HUVEC جابه جا گردید و شکل گیری شبکههای شبه مویرگی طی مدت زمان ۴۸ ساعت، توسط میکروسکوپ فاز معکوس مورد بررسی قرار گرفت.
بررسی مهاجرت سلولهای :HUVEC تعداد ۵×۱۰۵ سلول در ظروف کشت ۲۴ چاهکی کشت داده شد، سپس با کمک چاقوی جراحی به کف هر چاهک خراشی داده شد
و سلولها با تراکمهای مختلف MCP مورد تیمار قرار گرفتند. مهاجرت سلولهای HUVEC به منظور پر کردن خراش به مدت ۴۸ ساعت ، توسط میکروسکوپ فاز معکوس دنبال شد.
تجزیه و تحلیل آماری: تجزیه و تحلیل های آماری با استفاده از نرم افزار SPSS و تست پارامتریک ANOVA
یک طرفه و دو طرفه انجام شد. نتایج به صورت ±SEM
میانگین (n =3) نشان داده شده است.
نتایج
اثر MCP بر ریختشناسی سلولی: ریخت شناسی سلولهای DU145 پس از ۴۸ ساعت در نمونه شاهد به صورت تک لایه، چسبیده به کف فلاسک و در حال تقسیم مشاهده می شوند. در نمونه های با غلظت پایینMCP
۰/۰۱) و (۰/۰۵ g/ml تغییری در ریخت شناسی سلولها نسبت به سلولهای شاهد مشاهده نشد. اما در نمونه هایی که با غلظتهای بالای ۰/۱) MCP، ۰/۵، و (۱ g/ml تیمار شده بودند، تغییرات قابل ملاحظه ای در شکل آنها دیده شد (شکل :(۱
• تغییرات عمده در حالت طبیعی غشاءی سلولی و گرانوله شدن سلولها
• کاهش حجم سلول
در مورد سلولهای HUVEC ، پس از ۲۴ و ۴۸ ساعت انکوباسیون، سلولهای گروه کنترل به صورت تک لایه به ته ظرف می چسبند ( شکل .( ۲ -a در انکوباسیون ۴۸ ساعت و در غلظتهای پایین ۰/۰۱) MCP، ۰/۰۵ و (۰/۱ g/ml
تغییری در شکل آنها نسبت به سلولهای شاهد مشاهده نگردید. در حالی که غلظتهای بالای ۰/۵) MCP، و g/ml
(۱ تغییر در شکل سلولها شامل چروکیده شدن غشاء، گرانوله شدن سیتوپلاسم و جدا شدن سلولها از کف فلاسک می باشد (شکل.(۲
۴۲۸
مجله پژوهشهای سلولی و مولکولی (مجله زیست شناسی ایران) جلد ۲۶، شماره ۴، ۱۳۹۲
شکل – ۱ مورفولوژی سلولهای DU145 پس از ۴۸ ساعت تیمار با غلظتهای مختلف – (mg/ml )MCP با افزایش غلظت MCP سلولها چروکیده شده و در سیتوپلاسم آنها گرانولهایی مشاهده میشود.
اثر MCP بر درصد زیستایی سلول: در زمانهای ۲۴
ساعت و ۴۸ ساعت غلظتهای ۰/۰۵، ۰/۱ ،۰/۵، ۱ g/ml
MCP کاهش معنی دار درصد زیستایی سلولهای DU145
نسبت به گروه کنترل مشاهده گردید (نماد *** برای
p< 0/001 و نماد ** برای .(p0/01 بررسی آماری توسط آزمون ANOVA دو طرفه می باشد. کاهش درصد
زیستایی سلولهای DU145 وابسته به دز (p<0/001) و
وابسته به زمان (p<0/001) است، اما اختلاف معنی دار بین دو زمان ۲۴ و ۴۸ ساعت انکوباسیون دیده نشد. بنابراین می توان نتیجه گیری کرد که، MCP در حالت وابسته به دز و در زمان ۲۴ ساعت سبب کاهش بقای سلولهای DU145
می گردد (شکل.(۳
اشتراکگذاری:
- لینک دانلود فایل بلافاصله بعد از پرداخت وجه به نمایش در خواهد آمد.
- همچنین لینک دانلود به ایمیل شما ارسال خواهد شد به همین دلیل ایمیل خود را به دقت وارد نمایید.
- ممکن است ایمیل ارسالی به پوشه اسپم یا Bulk ایمیل شما ارسال شده باشد.
- در صورتی که به هر دلیلی موفق به دانلود فایل مورد نظر نشدید با ما تماس بگیرید.
