یزد دانلود |
دانلود فایل علمی فایل ورد کامل مقاله پژوهشی درباره شناسایی شاخصهای Escherichia coli و Enterococcus faecalis در منابع آب و ارزیابی کیفیت آنها
در حال بارگذاری
توجه : به همراه فایل word این محصول فایل پاورپوینت (PowerPoint) و اسلاید های آن به صورت هدیه ارائه خواهد شد
فایل ورد کامل مقاله پژوهشی درباره شناسایی شاخصهای Escherichia coli و Enterococcus faecalis در منابع آب و ارزیابی کیفیت آنها دارای ۸ صفحه می باشد و دارای تنظیمات در microsoft word می باشد و آماده پرینت یا چاپ است
فایل ورد فایل ورد کامل مقاله پژوهشی درباره شناسایی شاخصهای Escherichia coli و Enterococcus faecalis در منابع آب و ارزیابی کیفیت آنها کاملا فرمت بندی و تنظیم شده در استاندارد دانشگاه و مراکز دولتی می باشد.
توجه : در صورت مشاهده بهم ریختگی احتمالی در متون زیر ،دلیل ان کپی کردن این مطالب از داخل فایل ورد می باشد و در فایل اصلی فایل ورد کامل مقاله پژوهشی درباره شناسایی شاخصهای Escherichia coli و Enterococcus faecalis در منابع آب و ارزیابی کیفیت آنها،به هیچ وجه بهم ریختگی وجود ندارد
بخشی از متن فایل ورد کامل مقاله پژوهشی درباره شناسایی شاخصهای Escherichia coli و Enterococcus faecalis در منابع آب و ارزیابی کیفیت آنها :
مقدمه
امروزه تأمین و توزیع آب در کشورهای درحال توسعه هزینه-های گزافی را بر دولتها تحمیل میکند. این مسئله بهخصوص در کشورهای خشک و نیمهخشک اهمیت بیشتری دارد. هر هشتثانیه یک کودک بهعلت بیماریهای وابسته به آب جان
خود را از دست میدهد (World Health Organization, . 2002) نیمی از مردم کشورهای درحال توسعه از بیماریهای وابسته به آب رنج میبرند و هشتاد درصد بیماریهای عفونی در این کشورها ناشی از آلودگی آبهای آشامیدنی است (Parry . & Mortimer, 1984) جنسهای مهم میکروارگانیسمها که سبب بیماریهای عفونی ناشی از آب آلوده میشوند شامل گونههای Salmonella sp.، Shigella sp. و E. coli می باشند. لذا شناسایی باکتریهای بیماریزا و سپس حذف آنها از آب ضروری است .(Taylor & Haris, 1965) ورود فاضلابهای خانگی، فاضلابهای مراکز دام و طیور و پساب-های کشاورزی به محیط زیست به آلودگی آبهای زیر زمینی منجر میشود .(Fujioka & Yoneyama, 2001) نهتنها آلودگیهای میکروبی بلکه عناصر سمی مثل آرسنیک و گازهای آلایندهای مثل متان در مناطقی که استخراج انجام می-شود موجب آلودگی آبهای زیرزمینی میشوند (Megan et
.al., 2007; Obsorna et al., 2011)
آژانس حفاظتی اروپا (EPA) در سال ۱۹۹۸ اعلام کرد عنصر کلیدی در مطالعه منابع آبهای زیرزمینی، بررسی وجود یا عدموجود آلودگیهای مدفوعی است که برایناساس اندازه-گیری یکی از سه شاخص مدفوعی یعنی E. coli، Enterococci یا Coli phage باید انجام گیرد. مطابق قوانین، برای آبهای زیرزمینی حداقل مقدار ۱۰۰ میلیلیتر از هر منبع آب برای یکی از سه شاخص پیشگفته باید بررسی گردد. در این رابطه، آزمونهای استاندارد شامل دو روش محتمل ترین تعداد (Most Probably Number= MPN) و فیلتراسیون غشایی (Membrane Filtration=MF) است. در این مطالعه، آب شرب شهر بجنورد تحت مطالعه میکروبی قرار گرفت. آب آشامیدنی شهر بجنورد از طریق ۱۷ حلقه چاه موجود در سطح شهر و خارج از شهر تأمین میشود. کلیه آب شرب شهر در تمام
۱۱/۱۱ Nova Biologica Reperta 1 (2): 10-15 (2015)
طول سال از این چاهها تأمین میشود. بررسی میکروبی این منابع ازنظر سلامت آب بهلحاظ ویژگیهای فیزیکوشیمیایی و میکروبی الزامی است.
مواد و روشها
نمونهگیری از شش ایستگاه شامل سه ایستگاه در خارج از شهر و سه ایستگاه در سطح شهر انجام گرفت. تحلیلهای فیزیکوشیمیایی شامل اندازهگیری مقدار اکسیژن محلول، pH، کدورت و دما توسط دستگاه های پرتابل کالیبره در محل نمونه برداری انجام شد. برای مطالعه میکروبی نمونههای آب، دقت و سرعت در انتقال نمونهها از اهمیت بالایی برخوردار است تا کمترین تغییر در تراکم باکتریهای آب رخ دهد، بنابراین، آزمایش MPN از آب مطابق استاندارد انجام گرفت (Eaton, .1995) سپس مراحل آزمونهای احتمالی، تأییدی و تکمیلی میکروبی انجام شد. باتوجه به لولههای مثبت، تعداد باکتری از جدول MPN در ۱۰۰ میلیلیتر از آب محاسبه میشود
.(Halvorson & Ziegler, 1933) برای انجام آزمون فیلتراسیون غشایی (MF)، ۱۰۰ میلی لیتر از نمونه آب با استفاده از پمپ خلأ از فیلترهای غشایی نیتروسلولزی با قطر ۴۷ mm و دارای منافذی با اندازه ۰/۴۵ µm عبور داده شد. سپس فیلتر روی محیط کشت انتخابی قرار گرفت تا شمارش مستقیم باکتری موردنظر انجام گیرد. به منظور رشد باکتریها، فیلترها به محیطهای کشت انتخابی و اختصاصی انتقال دادهشد (Richard
et al., 2005; U.S. & Environmental Protection .Agency.1985-2002)
آزمونهای احتمالی و تأئیدی E.coli
برای جداسازی و شناسایی E. coli از روش MPN در مرحله احتمالی، از محیط کشت لوریلسولفات براث استفاده شد. از دمای ۳۵ درجه سانتیگراد به منظور رشد Total coliform و ۴۴/۵ درجه سانتیگراد به منظور رشد Fecal coliform های ترموفیل به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت استفاده شد. در مرحله تأییدی، از نمونههای مثبت مرحله احتمالی به محیط کشت برلیانت بایل گرین لاکتوز براث تلقیح شد و در دمای ۳۵ درجه سانتیگراد به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت گرماگذاری گردید. در مرحله تکمیلی
یافتههای نوین در علوم زیستی جلد ۱، شماره ۱۰-۱۵ :۲
به منظور تأیید باکتری E.coli از محیط کشت Escherichia (ECD Agar) coli Direct Agar استفاده شد. گرماگذاری این محیط ها در دمای ۴۴/۵ درجه سانتیگراد انجام گردید. محیط های کشت به مدت ۲۴ ساعت در دمای ۴۴/۵ درجه سانتیگراد گرماگذاری شد. بعد از گرماگذاری تعداد کلنیها شمارش و تعداد باکتری در حجم ۱۰۰ میلی لیتر از نمونه آب طبق معادله زیر محاسبه گردید:
/۱۰۰ml×۱۰۰ تعداد کلنی های شمارش شده CFU/ 100 ml=
آزمونهای احتمالی و تأئیدی E. faecalis
جداسازی و شناسایی E. faecalis به روش MPN بدین صورت انجام شد که در مرحله احتمالی از رقتهای مختلف آب، به محیط کشت SF broth تلقیح شد. این محیط کشت در دمای ۴۵ درجه سانتیگراد به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت گرماگذاری شد. سپس درمراحل تأییدی و تکمیلی از لولههای مثبت مرحله احتمالی به محیطهای کشت تأییدی Bile Esculin Azid Agar و Bile Esculin Agar انتقال یافت. این محیطها به مدت ۲۴ ساعت در دمای ۳۵ درجه سانتیگراد گرماگذاری شد و سپس کلنیها تحت بررسی قرار گرفت.
جداسازی باکتری E. faecalis به روش فیلتر غشایی بدین صورت انجام شد که بعد از فیلتراسیون حجم های مناسب نمونه های آب، فیلترها روی محیط کشت m-Enterococcus agar گذاشته شد و گرما گذاری در دمای ۳۵ درجه سانتیگراد انجام شد. بهمنظور تأیید باکتریهای مورد نظر از کلنیهای بهدست-
آمده روی محیط های کشت Bile Esculin Azid Agar و Bile Esculin Agar به صورت خطی کشت داده شد. این محیطها به مدت ۲۴ ساعت در ۳۵ درجه سانتیگراد گرماگذاری شد. درنهایت، آزمونهای تأییدی باکتری E. coli و E. faecalis انجام شد. آزمونهای افترافی جهت شناسایی و تأیید جدایههای E. coli و E. faecalis شامل کاتالاز، تحمل نمک، رشد در محیط قلیایی و تحمل دماهای ۱۰، ۴۵ و ۶۰ درجه سانتیگراد و رشد در %./۱ متیلن بلو برای E. faecalis
۱۲/۱۲ Nova Biologica Reperta 1 (2): 10-15 (2015)
و آزمون های کاتالاز، اکسیداز، تخمیر گلوکز، KOH ، IMViC و TSI برای باکتری E. coli انجام گرفت.
نتایج
شمارش تعداد کل باکتریهای موردنظر با روش MPN انجام شد و نتایج آن در جدول ۱ ارائه شده است. بیشترین تعداد باکتریهای شاخص با روش MPN در ایستگاه شماره شش و پس از آن ایستگاه شماره پنج نشان داده شد. دادهها با %۹۵ اطمینان محاسبه و تحلیل گردید. با استفاده از روش فیلتر غشایی، بیشترین آلودگی در ایستگاه شماره شش مشاهده شد.
مشخصات کلیه ایستگاهها و میزان فاکتورهای فیزیکوشیمیایی اندازهگیریشده است و نزد شرکت آب و فاضلاب شهرستان بجنورد است. آزمونهای تأییدی مربوط به تشخیص نوع کلنیها نیز با استفاده از آزمون های افتراقی انجام شد.
بحث
در این مطالعه برای بررسیهای میکروبی آب از دو روش MF و MPN استفاده شد. مطابق مطالعات انجامشده و استاندارد، روش MF مناسبتر از MPN ارزیابی شده است. همچنین بررسیها نشان داده است که استفاده از روش MPN تراکم میکروارگانیسمها را بیش از حد واقعی ارائه میدهد. مطابق بررسیهای انجام شده افزایش تعداد لولههای مربوط به آزمون MPN نیز می تواند بر دقت آزمایش بیفزاید. بههرحال این روش، میانگینی از تراکم احتمالی باکتریها ارائه میدهد.
ازآنجا که در روش MF حجم و رقتهای مختلفی از نمونه قابل ارزیابی است، طیف گستردهتری از باکتریهای موجود در آب به طور مستقیم قابل جداسازی و شمارش هستند. پیش از این برای شناسایی E. coli و کلی فرمها از آزمون تخمیر لاکتوز در ۴۴C استفاده میشده است. اما برخی از سویههای کلی فرمی مانند بعضی از جدایههای E. coli قادر به تخمیر لاکتوز نیستند.
علت این امر بیان ژن مربوط به تخمیر لاکتوز تحت عوامل مختلف محیطی همچون دما، محیط کشت، مدت گرماگذاری
یافتههای نوین در علوم زیستی جلد ۱، شماره ۱۳/۱۳ Nova Biologica Reperta 1 (2): 10-15 (2015) 10-15 :2
است .(Hoadly & Dutka, 1977) در سال ۲۰۰۰
دستورالعمل ایزو به شماره ۱-۹۳۰۸، E. coli را براساس
lactose triphenol tetrazolium chloride trigitol-7 (LTTC) شناسایی کرده است.
امروزه E. coli براساس فعالیت آنزیم بتاگالاکتوزیداز شناسایی میگردد .(Eaton,1995) سازمان حفاظت محیطزیست امریکا در سال ۲۰۰۲ روش تغییر یافته m-TEC Agar را برای شناسایی E. coli معرفی کرد که در این روش نیز اساس
شناسایی، تجزیه ۴-methyl-umbelliferil–
(MUG) D glucoronid است.
اشتراکگذاری:
- لینک دانلود فایل بلافاصله بعد از پرداخت وجه به نمایش در خواهد آمد.
- همچنین لینک دانلود به ایمیل شما ارسال خواهد شد به همین دلیل ایمیل خود را به دقت وارد نمایید.
- ممکن است ایمیل ارسالی به پوشه اسپم یا Bulk ایمیل شما ارسال شده باشد.
- در صورتی که به هر دلیلی موفق به دانلود فایل مورد نظر نشدید با ما تماس بگیرید.
