یزد دانلود |
دانلود فایل علمی فایل ورد کامل مقاله علمی درباره اثر پکتین سیب یا اسید پکتیـک (AP) و پکتین اصلاحشده مرکبات (MCP) بر ترشح نیتریکاکساید در دودمان سلولهای توموری هیپوفیز موش GH3/B6
در حال بارگذاری
توجه : به همراه فایل word این محصول فایل پاورپوینت (PowerPoint) و اسلاید های آن به صورت هدیه ارائه خواهد شد
فایل ورد کامل مقاله علمی درباره اثر پکتین سیب یا اسید پکتیـک (AP) و پکتین اصلاحشده مرکبات (MCP) بر ترشح نیتریکاکساید در دودمان سلولهای توموری هیپوفیز موش GH3/B6 دارای ۱۴ صفحه می باشد و دارای تنظیمات در microsoft word می باشد و آماده پرینت یا چاپ است
فایل ورد فایل ورد کامل مقاله علمی درباره اثر پکتین سیب یا اسید پکتیـک (AP) و پکتین اصلاحشده مرکبات (MCP) بر ترشح نیتریکاکساید در دودمان سلولهای توموری هیپوفیز موش GH3/B6 کاملا فرمت بندی و تنظیم شده در استاندارد دانشگاه و مراکز دولتی می باشد.
توجه : در صورت مشاهده بهم ریختگی احتمالی در متون زیر ،دلیل ان کپی کردن این مطالب از داخل فایل ورد می باشد و در فایل اصلی فایل ورد کامل مقاله علمی درباره اثر پکتین سیب یا اسید پکتیـک (AP) و پکتین اصلاحشده مرکبات (MCP) بر ترشح نیتریکاکساید در دودمان سلولهای توموری هیپوفیز موش GH3/B6،به هیچ وجه بهم ریختگی وجود ندارد
بخشی از متن فایل ورد کامل مقاله علمی درباره اثر پکتین سیب یا اسید پکتیـک (AP) و پکتین اصلاحشده مرکبات (MCP) بر ترشح نیتریکاکساید در دودمان سلولهای توموری هیپوفیز موش GH3/B6 :
مقدمه
نیتریک اکساید برای اولین بار در سال ۱۹۸۷به عنوان یک که به نیتریک اکساید فعال ویژه (RNOS) شهرت دارد.
فاکتور شل کننده در عروق کشف شد .(۱۳) این ماده RNOS نوع ویژه ای از نیتریک اکساید است که از اکسید
چربی دوست است و قابلیت انتشار بالایی برای عبور از شدن نیتریک اکساید توسط سوپر اکسید تولید می شود و
عرض غشاء دارد، فعالیت آن به نوع سلول هدف و تراکم باعث ایجاد رادیکالهای آزاد نیتریک اکساید می گردد. این
آن بستگی دارد .(۱۸) نیتریک اکساید دارای نیمه عمر مواد میل ترکیبی بالایی برای پروتئینها و نوکلوتیدها دارند
کوتاهی است که بین۴۵-۱۵ ثانیه است(.(۲۰ این ماده به که شامل نیتروژن دی اکساید، نیتروژن تری اکساید، دی
تنهایی قادر به ایجاد واکنش با پروتئینها و نوکلوتید ها نمی نیتروژن تری اکساید و دی نیتروژن تترا اکساید می باشند.
باشد ولی در حضور سوپر اکساید واکنش پذیر می گردد،
۱۴۴
NO3-
مجله پژوهشهای سلولی و مولکولی (مجله زیست شناسی ایران)
واکنش شیمیایی تولید RNOS به صورت زیر می باشد
.(۲۱)
Nitrogen dioxide 2NO + O22NO2
Nitrogen trioxide NO2 +1/2O2NO3
Dinitrogen trioxide NO2+NON2O3
Dinitrogen tetraoxide NO2+ NO2N2O4
RNOS می تواند با بار مثبت یونهای فلزی موجود در کمپلکس آنزیمها واکنش دهد، مانند واکنش نیتریک اکساید با آهن موجود در هموگلوبین که باعث تولید آنیون NO3 و
مت هموگلوبین می گردد. ترکیب یون با آهن
موجود در گوانیل سیکلاز باعث تولید کمپلکس آهن-
نیتروزیل و غیر فعال شدن گوانیل سیکلاز می گردد. آنیون
NO3 می تواند باعث القای آسیب به DNA، پراکسیداسیون لیپیدها و شکستن پروتئینها گردد .(۵)
نیتریک اکساید از ال- آرژنین ساخته می شود. برای انجام این واکنش NADPH، FAD، BH4 و اکسیژن لازم است.
محصولات ابن واکنش نیتریک اکساید و سیترولین می باشند. کاتالیز این واکنش توسط آنزیم نیتریک اکساید سنتتاز صورت می گیرد ۱۵) و .(۱۶
ایزوفرمهای مختلفی ازآنزیم نیتریک اکساید سنتتاز (NOS)
وجود دارد که دریک دامنه وسیع از شرایط فیزیولوژیک و پاتولوژیک فعال می گردند. این ایزوفرمها در دوگروه کلی قرار می گیرند.
-۱ ایزوفرمهای وابسته به کلسیم: این ایزوفرمها مقدار نیتریک اکساید کمتری نسبت به گروه دیگر تولید می کنند که مقدار آن در حد نانومولار است. این ایزوفرمها شامل دو گروه می باشند که عبارتند از:
– نیتریک اکساید سنتتاز اندوتلیوم رگی((eNOS که در گشاد کردن رگها مؤثر است(.(۳
– نیتریک اکساید سنتتاز عصبی((nNOS که در سلول عصبی فعال می باشد و در پلاستیسته نورونی دخالت دارد(.(۱۴
جلد ۲۷، شماره ۱، ۱۳۹۳
-۲ ایزوفرم غیر وابسته به کلسیم: در این ایزوفرم مقدار تولید نیتریک اکساید در حد میکرومولار است که شامل یگ گروه می باشد.
– نیتریک اکساید سنتتاز القایی (iNOS) که ابتدا در سلولهای ایمنی کشف شد و اینتر لوکین ها و TNF-
می توانند آن را فعال کنند(.(۲۲
لازم به ذکر است که، نقش نیتریک اکساید در سلولهای سرطانی به خوبی شناخته نشده است و اثر این ماده به نوع سلول و مقدار تراکم آن بستگی دارد. تحقیقات نشان داده است که، نیتریک اکساید در بعضی از سلولها نقش آپوپتوزی (۸) و در بعضی دیگر نقش ضد آپوپتوزی دارد.
به عنوان مثال، اضافه کردن دهنده های نیتریک اکساید به سلولهای مونوسیت U937 باعث جلوگیری از روند آپوپتوز در این سلولها می شود .(۱۲) در ضمن، در سلولهای سرطان سینه انسان MCF-7 تراکم پایین از یک دهنده نیتریک اکساید مانند سدیم نیترو پروساید (SNP) باعث مهار آپوپتوز می شود در حالی که، تراکم بالای آن قادر به القای آپوپتوز در این سلولها می باشد .(۷) علاوه بر این، در سلولهای ماکروفاژی Raw-264، دهنده های نیتریک اکساید مانند نیتروگلوتامین و SNP باعث القای بیان پروتئین p53 و افزایش بروز آپوپتوز در این سلول می گردند .(۶)
در تحقیق حاضر از دودمان سلول توموری هیپوفیز موش
GH3/B6 استفاده شد که قابلیت سنتز و ترشح هورمون رشد و پرولاکتین را دار می باشد .(۱۰) در ضمن، این دودمان سلولی ایزوفرمهای iNOS و nNOS را نیز بیان می کند .(۱۹)
مواد و روشها
– کشت سلول:GH3/B6 سلولهای GH3/B6 در محیط کشت (GIBCO) HamsF12 به همراه ۱۲/۵ درصد سرم اسب (HIMEDIA) و ۲/۵ درصد سرم جنین گوساله
۱۴۵
مجله پژوهشهای سلولی و مولکولی (مجله زیست شناسی ایران) جلد ۲۷، شماره ۱، ۱۳۹۳
(GIBCO) غیر فعال شده کشت داده شد. شرایط اتمسفری مناسب برای رشد این سلولها رطوبت ۹۵ درصد، دمای ۳۷
درجه سانتی گراد و ۵ درصد دی اکسید کربن می باشد.
این سلولها به صورت تک لایه به سطح فلاسک چسبیده و تکثیر می شوند ۱) و.(۲
– بررسی درصد مهار تکثیر سلول: برای به دست آوردن درصد مهار تکثیر سلول از روش MTT استفاده شد. ۲۰۰در هر چاهک پلیت ۹۶ خانه ای تعداد ۱۰۴ سلول کشت داده شد. سلولها پس از ۷۲ ساعت پیش انکوباسیون، با غلظتهای مختلف (FLUKA) AP ، MCP
(EcoNugenics) و(MERCK ) SNP تیمار شد. سپس پلیتها برای مدت زمانهای ۶، ۲۴ و ۴۸ ساعت در انکوباتور
– سنجش نیتریک اکساید: برای سنجش نیتریک اکساید از واکنشگر گریس استفاده شد. بدین منظور تعداد ۱۰۵ سلول در هر چاهک مولتی دیشهای ۲۴ خانه ای کشت داده شد.
پس از ۷۰ ساعت پیش انکوباسیون، سلولها با غلظتهای مختلف AP ، MCP و SNP تیمار شدند. پلیتها برای زمانهای ۲، ۴، ۶، ۲۴ و ۴۸ ساعت در انکوباتور قرار گرفتند. پس از طی زمان مورد نظر ۵۰µl از محیط رویی سلول را برداشته و به آن ۵۰µl محلول سولفانیل آمید
آنالیز آماری: آنالیزهای آماری با استفاده از نرم افزار SPSS 15 و تست پارامتریک ANOVA یک طرفه انجام شده
قرار گرفتند. پس از طی زمان مورد نظر به هر چاهک ۲۰l
از محلول (SIGMA) MTT با غلظت ۵mg/ml اضافه شد و در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد برای مدت ۳ ساعت انکوبه گردید. سپس پلیت حاوی سلولها از انکوباتور خارج شده و محیط روی سلولها تخلیه و به چاهکهای مورد نظر (SIGMA)DMSO 200l اضافه گردید. سپس میزان جذب با دستگاه microplate Reader در طول موج ۶۳۰nm مورد بررسی قرار گرفت. برای به دست آوردن مهار تکثیر سلول از فرمول زیر استفاده گردید .(۱۸) بر این اساس مهار تکثیر سلولها در زمانهای مختلف و غلظتهای مختلف ماده مورد نظر به دست آمد.
(MERCK) اضافه گردید و سپس ۵۰µl محلول NED
(Naphthylethyl-enediamindihydrochloride) (MERCK) نیز به همه چاهکها اضافه گردید. جذب با دستگاه microplate Reader در طول موج ۵۷۰nm خوانده شد. میزان جذب در این طول با مقدار آزاد سازی نیتریک اکساید رابطه مستقیم دارد(.(۱۱ میزان ترشح نیتریک اکساید برای هر غلظت از مواد مورد استفاده جهت تیمار از رابطه زیر استفاده شد:
است. P 0/05 به عنوان اختلاف معنی دار محاسبه گردید.
نتایج به صورت ±SEM میانگین (n =3) نشان داده شد.
۱۴۶
مجله پژوهشهای سلولی و مولکولی (مجله زیست شناسی ایران) جلد ۲۷، شماره ۱، ۱۳۹۳
شکل -۱ تغییرات مورفولوژیکی سلولها پس از تیمار با ۵ mg/ml اسید پکتیک در زمان انکوباسیون۴۸ ساعت. در تصویر سمت راست کاهش حجم سلول و گرانوله شدن سلولها نشان داده شده است تصویر سمت چپ گروه کنترل می باشد.
شکل -۲ تغییرات مورفولوژیکی سلولها پس از تیمار با MCP 5 mg/ml در زمان انکوباسیون۴۸ ساعت. در تصویر سمت راست کاهش حجم سلول و گرانوله شدن سلولها نشان داده شده است تصویر سمت چپ گروه کنترل می باشد.
شکل -۳ تغییرات مورفولوژیکی سلولها پس از تیمار با SNP10mM در زمان انکوباسیون۴۸ ساعت. در تصویر سمت راست کاهش حجم سلول و گرانوله شدن سلولها نشان داده شده است تصویر سمت چپ گروه کنترل می باشد.
۱۴۷
مجله پژوهشهای سلولی و مولکولی (مجله زیست شناسی ایران)
نتایج
– اثر AP ، MCP و SNP بر مورفولوژی سلولهای
: GH3/B6 به منظور مطالعه اثر AP، MCP و SNP بر
مورفولوژی سلولهای GH3/B6، تعداد ۱۰۴ سلول در هر چاهک پلیت ۹۶ خانه ای کشت داده شد. مدت پیش انکوباسیون ۷۲ ساعت در نظر گرفته شد. سپس غلظتهای مختلف از AP (شکل(۱، MCP (شکل(۲ ،SNP (شکل(۳
در زمان ۴۸ ساعت روی سلولها اثر داده شد. این سلولها به وسیله میکروسکوپ اینورت مورد بررسی و عکسبرداری قرار گرفتند.
تغییرات مورفولوژیکی سلولهای GH3/B6 پس از سپری شدن ۴۸ ساعت به ترتیب زیر می باشد
-۱ گروه سلولهایی که نمونه کنترل می باشند در آنها تغییری از این نظر ایجاد نشده است.
-۲ در سلولهای تیمار شده با دوز بالا AP، MCP و SNP
تغییراتی نظیر چروکیده شدن غشاء، کاهش حجم سلول وگرانوله شدن آن مشاهده گردید. ضمنا تعدادی از سلولها از کف فلاسک جدا شده وشناور گردیدند.
-بررسی درصد مهار تکثیر سلولهای GH3/B6 به وسیله
تست AP : MTT وMCP در زمان ۶ ساعت تیمار تأثیر
محسوسی بر درصد مهار تکثیر سلولهای GH3/B6
جلد ۲۷، شماره ۱، ۱۳۹۳
نداشت، اما APدر زمان ۲۴ و ۴۸ ساعت در غلظتهای ۵ mg/ml و ۲/۵ باعث افزایش معنی دار درصد مهار تکثیر سلولها نسبت به گروه کنترل گردید ( p<0.001) (شکل.(۴
همچنین MCP در زمان ۲۴ و ۴۸ ساعت با غلظتهای ۵ mg/ml و ۳ باعث افزایش معنی دار مهار تکثیر سلولهای GH3/B6 نسبت به گروه کنترل می شود.
( p<0.001) (شکل.(۵
SNP با غلظتهای ۲۰ mM و ۱۰، ۵ پس از ۶ ساعت انکوباسیون باعث افزایش معنی دار مهار تکثیر سلولهای
GH3/B6 نسبت به گروه کنترل شد .(p<0.001) این ماده در زمانهای ۲۴ و ۴۸ با غلظتهای۲۰ mM و ۱۰، ۵، ۱
افزایش معنی دار مهار تکثیر سلولهای GH3/B6 نسبت به گروه کنترل را نشان داد (p<0.001) (شکل.(۶
بنابراین می توان این گونه نتیجه گرفت که، درصد مهار تکثیر سلولهای GH3/B6 تحت تأثیر AP، MCP و SNP
در یک حالت وابسته به دوز و زمان، افزایش نشان می دهد. در ضمن مهار تکثیر سلولهای GH3/B6 که تحت انکوباسیون ۴۸ ساعت قرار گرفته اند افزایش معنی داری نسبت به مهار تکثیرسلول در انکوباسیون ۲۴ ساعت نشان
داد .( p<0.001)
شکل -۴ اثر غلظتهای متفاوت اسید پکتیک بر درصدمهار تکثیرسلولهای GH3/B6 پس از۶و۲۴و۴۸ساعت انکوباسیون. غلظتهای ۲/۵mg/ml و۵ AP باعث افزایش معنی دار مهار تکثیر سلولهای تحت تیمار نسبت به گروه کنترل شده است. مقادیر ارائه شده معادل mean±S.E.M می باشند.
a = p<0.001)، و (N=3
۱۴۸
مجله پژوهشهای سلولی و مولکولی (مجله زیست شناسی ایران) جلد ۲۷، شماره ۱، ۱۳۹۳
شکل-۵ اثر غلظتهای متفاوت پکتین تغییر شکل یافته مرکبات بر درصد مهار تکثیر سلولهای GH3/B6پس از ۶، ۲۴ و۴۸ساعت انکوباسیون. غلظتهای ۱/۵mg/mlو۳وMCP5باعث افزایش معنی دار مهار تکثیر سلولهای تحت تیمار نسبت به گروه کنترل شده است. مقادیر ارائه شده معادل
mean±S.E.M می باشند. a = p<0.001)، و (N=3
شکل-۶ اثر غلظتهای متفاوت سدیم نیتروپروساید بر درصد مهار تکثیر سلولهای GH3/B6 پس از ۶، ۲۴ و۴۸ ساعت انکوباسیون. غلظتهای ۲۰ ،۱۰
،۵ ،۱، ۰/۵میلی مولار سدیم نیتروپروساید تفاوت معنی داری در افزایش مهار تکثیر سلولهای تیمار شده نسبت به کنترل ایجاد کرده است. مقادیر ارائه شده معادل mean±S.E.Mمی باشند. a = p<0.001)، b = p<0 .01، c = p<0. 05 و (n=3
اشتراکگذاری:
- لینک دانلود فایل بلافاصله بعد از پرداخت وجه به نمایش در خواهد آمد.
- همچنین لینک دانلود به ایمیل شما ارسال خواهد شد به همین دلیل ایمیل خود را به دقت وارد نمایید.
- ممکن است ایمیل ارسالی به پوشه اسپم یا Bulk ایمیل شما ارسال شده باشد.
- در صورتی که به هر دلیلی موفق به دانلود فایل مورد نظر نشدید با ما تماس بگیرید.
