فایل ورد کامل گیرنده اوپیوئیدی مو؛ بررسی بیان ژن و اسپلایس واریانت‌ها در لکوسیت‌های تک‌هسته‌ای افراد وابسته به اوپیوئیدها

فهرست مطالب
عناوین
۱- مقدمه                                                                                                                                                        
۱-۱- اوپیوئیدها-کلیات                                                                                                                          
۱-۱-۲- مکانیسم های پیام رسانی اوپیوئیدها و پیام برهای ثانویه                                                                        
۱-۱-۲-۱- مهار آدنیلیل سیکلاز                                                                                                               
۱-۱-۲-۲-فعال سازی هدایت پتاسیم و مهار هدایت کلسیم                                                                              
۱-۱-۲-۳- مهار رهایش ترانسمیترها                                                                                                          
۱-۱-۲-۴- فعال کردن پروتئین کیناز  C(PKC)                                                                                          
۱-۱-۲-۵- آزاد سازی کلسیم از ذخایر داخل سلولی                                                                                        
۱-۱-۲-۶- نشانه پردازی هسته ای                                                                                                            
۱-۱-۳- تغییرات تطابقی سلولی حاصل از مصرف مزمن مرفین                                                                           
۱-۱-۳-۱- حساسیت زدایی (desensitization) حاد                                                                                   
۱-۱-۳-۲- اینترنالیزاسیون                                                                                                                    
۱-۱-۳-۳- حساسیت زدایی طولانی مدت و Down-Regulation                                                                 
۱-۱-۳-۴- تغییرات تطابقی جبرانی                                                                                                         
۱-۱-۳-۴-۱- آدنیلیل سیکلاز                                                                                                               
۱-۱-۳-۴-۲- کانال پتاسیمی ، کلسیمی و کاتیونی                                                                                       
۱-۱-۳-۴-۳- انتقال سیناپسی                                                                                                                
۱-۱-۳-۴-۴- آدنوزین                                                                                                                          
۱-۲- نوروبیولوژی اعتیاد                                                                                                                       
۱-۲-۱- منطقه VTA                                                                                                                        
۱-۲-۱-۱- تنظیم پیش سیناپسی رهایش گابا                                                                                           
۱-۲-۱-۲- تنظیم پیش سیناپسی رهایش گلوتامات                                                                                    
۱-۲-۱-۳- تجویز مزمن مرفین و تنظیم تحریک پذیری                                                                               
۱-۲-۱-۴- تجویز مزمن مرفین و تغییرات جبرانی پس سیناپسی در سلول های دوپامینی                                      
۱-۲-۲- هسته اکومبنس                                                                                                                     
۱-۲-۲-۱- تاثیرات حاد مرفین در هسته اکومبنس                                                                                     
۱-۲-۲-۲- محرومیت از مصرف مزمن مرفین                                                                                            
۱-۲-۳- سیستم های درگیر در جنبه های منفی اعتیاد به اوپیوئیدها                                                               
۱-۲-۳-۱- سیستم های نورآدرنرژیک                                                                                                     
۱-۲-۳-۲- سیستم های نزولی درگیر در سندرم محرومیت از اوپیوئیدها                                                           
۱-۲-۳-۳- سیستم های حسی صعودی در محرومیت از اوپیوئیدها                                                                 
۱-۳- اوپیوئیدها و سیستم ایمنی                                                                                                          
۱-۳-۱- شناسایی فارماکولوژیکی گیرنده های لوکوسیت ها                                                                          
۱-۳-۲- آثار اوپیوئیدها بر عملکرد سلول های فاگوسیتوز کننده                                                                    
۱-۳-۳- آثار اوپیوئیدها بر عملکرد سلول لنفوئیدی                                                                                    
۱-۳-۴- آثار اوپیوئیدها بر تولید سایتوکاین                                                                                             
۱-۳-۵- آثار اوپیوئیدها بر تیموس و طحال                                                                                             
۱-۳-۶- اوپیوئیدها و مقاومت به بیماری های عفونی                                                                                 
۱-۴- فرضیه مارکر محیطی                                                                                                               
۱-۵- متادون تراپی                                                                                                                         
۱-۶- گیرنده µ اوپیوئیدی و اسپلایس واریانت های آن                                                                             
۱-۶-۱- تعدد گیرنده های µ اوپیوئیدی – شواهد بالینی                                                                           
۱-۶-۲- تعدد گیرنده های µ – شواهد فارماکولوژیکی                                                                               
۱-۶-۳- تعدد گیرنده های µ اوپیوئیدی – بیولوژی ملکولی                                                                         
۱-۶-۴-Alternative Splicing
۱-۶-۵- اسپلایس واریانت -MOR-1
۲- مواد و روش ها                                                                                                                    
۲-۱- جامعه مورد مطالعه                                                                                                                  
۲-۲- تهیه نمونه خون                                                                                                                      
۲-۲-۱- مواد و وسایل مورد نیاز                                                                                                          
۲-۲-۲- آماده سازی محلول EDTA ( M 5/0 ، ۸ = PH )                                                                      
۲-۲-۳- روش تهیه نمونه خون                                                                                                           
۲-۳- انجام آزمون های هپاتیت B ، هپاتیت C و ایدز                                                                               
۲-۳-۱- تشخیص هپاتیت C                                                                                                             
۲-۳-۲ تشخیص هپاتیت B                                                                                                              
۲-۳-۳- تشخیص ایدز                                                                                                                    
۲-۴- آزمایش ادرار جهت شناسایی وجود داروهای مخدر در آن                                                                  
۲-۵- جدا کردن لنفوسیت ها از خون محیطی                                                                                       
۲-۵-۱- مواد و وسایل مورد نیاز                                                                                                        
۲-۵-۲- آماده سازی محلول PBS 10X                                                                                            
۲-۵-۳- روش جداسازی لنفوسیت ها                                                                                                 
۲-۶- استخراج RNA                                                                                                                   
۲-۶-۱- اجزای تشکیل دهنده کیت استخراج RNA و عملکرد آن ها                                                          
۲-۶-۲- مراحل عملی استخراج                                                                                                         
۲-۶-۳- اندازه گیری غلظت RNA با استفاده از اسپکتروفتومتری                                                              
۲-۶-۴- الکتروفورز نمونه های RNA                                                                                                
۲-۶-۴-۱- مواد و وسایل مورد نیاز                                                                                                    
۲-۶-۴-۲- آماده سازی بافر TBE 5X                                                                                              
۲-۶-۴-۳- روش عملی کار                                                                                                             
۲-۶-۴-۴- آشکارسازی ژل الکتروفورز                                                                                                
۲-۶-۴-۵- سنجش کیفیت RNA استخراج شده با استفاده از الکتروفورز                                                     
۲-۷- واکنش reverse transcription و سنتز cDNA – کلیات                                                           
۲-۷-۱- اجزای کیت سنتز cDNA                                                                                                  
۲-۷-۲- روش عملی سنتز cDNA                                                                                                  
۲-۸- Polymerase Chain Reaction (PCR) – کلیات                                                                  
۲-۸-۱- سیکل PCR
۲-۸-۱-۱- مرحله واسرشت (Denaturation)                                                                                   
۲-۸-۱-۲- اتصال (Annealing)                                                                                                   
۲-۸-۱-۳- ساخت (Extension)                                                                                                  
۲-۸-۲- تعداد سیکل ها                                                                                                               
۲-۸-۳- طراحی پرایمر- کلیات                                                                                                        
۲-۸-۳-۱- طراحی پرایمر با استفاده از نرم افزار                                                                                    
۲-۸-۴-PCR  اختصاصی برای ژن بتا اکتین                                                                                       
۲-۸-۴-۱- روش عملی کار                                                                                                             
۲-۹- Real-time PCR – کلیات                                                                                                  
۲-۹-۱- استفاده از رنگ های متصل شونده به DNA یا Intercalating Dyes                                          
۲-۹-۲- پروب های هیدرولیز شونده                                                                                                 
۲-۹-۲-۱- روش TaqMan 5´ Exonuclease Assay
۲-۹-۲-۲-Molecular Beacons
۲-۹-۲-۳- پروب‌های عقربی (Scorpion)                                                                                         
۲-۹-۳- پروب های هیبرید شونده (سیستم Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET))    
۲-۹-۴- تعاریف مهم در Real-Time PCR                                                                                    
۲-۹-۵- بهینه سازی واکنش  Real-time PCRبا استفاده از رنگ Sybr Green                                     
۲-۹-۶- آنالیز داده‌های Real-time PCR                                                                                      
۲-۹-۶-۱- منحنی استاندارد                                                                                                         
۲-۹-۶-۲- روش ارزیابی مطلق                                                                                                      
۲-۹-۶-۳- روش ارزیابی نسبی                                                                                                      
۲-۹-۶-۳-۱- ارزیابی نسبی با استفاده از دو منحنی استاندارد                                                                 
۲-۹-۶-۳-۲- روش مقایسه‌ای ΔΔCT                                                                                            
۲-۹-۶-۳-۳- آنالیز سنجش کمی به روش پافل                                                                                  
۲-۹-۷- مراحل عملی واکنش Real-time PCR                                                                              
۲-۹-۸- تعیین توالی محصولات Real-time PCR                                                                           
۲-۱۰-کشت سلول                                                                                                                    
۲-۱۰-۱- مواد و وسایل مورد نیاز                                                                                                  
۲-۱۰-۲- روش عملی کار                                                                                                           
۲-۱۱- آنالیز داده ها                                                                                                                 
۳- نتایج                                                                                                               
۳-۱- استخراج RNA از لنفوسیت های جدا شده از خون